Taxonomia molecular y transformacion genetica en el genero chlorobium

Zusammenfassung

En el presente trabajo se describe un protocolo de transformacion genetica de la especie chlorobium limicola. Para llevar a cabo tal proceso se utilizo como vector un plasmido natural, aislado de esta especie, que confiere la capacidad de utilizar el tiosulfato como dador de electrones en la fotosintesis. Asimismo, se han aplicado tecnicas moleculares y bioquimicas de tipificacion bacteriana con el fin de aportar nuevos datos a la taxonomia de estas bacterias. Una de dichas metodologias se basa en el uso combinado de la electroforesis de campo pulsado (pfge) con enzimas de restriccion de dianas poco frecuentes. Tal metodologia permitio obtener patrones de restriccion genomicos a partir de los cuales se pudo determinar el tamaño cromosomico de diecisiete cepas del genero chlorobium y establecer comparaciones de valor taxonomico. Ademas, el pfge permitio iniciar el estudio de la organizacion genomica de las bacterias estudiadas, pudiendose determinar que cada cepa presenta un unico cromosoma de tipologia circular y que algunas de ellas presentan elementos extracromosomicos de alto peso molecular. Los resultados obtenidos mediante pfge fueron complementados mediante otras tecnicas de tipificacion, concretamente analisis comparativo de patrones de hibridacion con sondas de rrna (ribotipificacion), de patrones de dna polimorfico amplificado al azar (rapd) y de patrones de proteinas resistentes a proteinasa k. Los resultados obtenidos con todas las tecnicas moleculares demuestran que las bacterias incluidas en el genero chlorobium presentan una gran heterogeneidad genetica y proteica. Por ultimo, se desarrollo un modelo matematico que permite calcular la probabilidad de repeticion al azar de los patrones de macrorrestriccion. Este modelo permite conocer el numero optimo de fragmentos para realizar comparaciones de patrones con la seguridad de que las coincidencias observadas son el reflejo de una relacion genetica real y no el re