Aislamiento de islotes pancreaticos humanos. Valoracion de su viabilidad funcional "in vitro"

Resumen

ES EVIDENTE QUE LA POSIBILIDAD DE AISLAR ISLOTES PANCREATICOS HUMANOS CON GARANTIAS HA ABIERTO UNA NUEVA Y ESPERANZADORA ALTERNATIVA TERAPEUTICA PARA LOS PACIENTES CON DIABETES MELLITUS INSULINO DEPENDIENTE, PROPORCIONANDONOS ADEMAS UN MATERIAL DE INDUDABLE VALOR PARA LA EXPERIMENTACION BASICA EN BIOMEDICINA. NO OBSTANTE ANTES DE UTILIZARLOS EN CUALQUIERA DE ESTAS OPCIONES DEBE DEMOSTRARSE PREVIAMENTE LA INTEGRIDAD FUNCIONAL Y MORFOLOGICA DEL MATERIAL OBTENIDO. DESDE ESTA PERSPECTIVA LOS OBJETIVOS PLANTEADOS FUERON LOS SIGUIENTES: ANALIZAR EL RENDIMIENTO, ES DECIR EL NUMERO DE ISLOTES PANCREATICOS HUMANOS OBTENIDOS, AL UTILIZAR UNA TECNICA AUTOMATIZADA DE AISLAMIENTO. DEMOSTRAR "IN VITRO" LA INTEGRIDAD FUNCIONAL DE LOS ISLOTES OBTENIDOS, ANALIZANDO SU CAPACIDAD DE SECRECION DE INSULINA ANTES Y DESPUES DE SU PURIFICACION. EVALUAR EL EFECTO DE LA DURACION DEL CULTIVO Y LA CONCENTRACION DE GLUCOSA EN EL MEDIO SOBRE LA SECRECION DE INSULINA Y EL METABOLISMO DE LA D-GLUCOSA. PARA ELLO SE PROCESARON UN TOTAL DE 29 PANCREAS HUMANOS MEDIANTE TECNICA AUTOMATIZADA Y PURIFICACION EN UN GRADIENTE DE SEROALBUMINA BOVINA. EL RENDIMIENTO OBTENIDO FUE DE 5831 ISLOTES/G DE TEJIDO ANTES DE LA PURIFICACION Y DE 2044 TRAS LA MISMA, CON UNA PUREZA DEL MATERIAL DEL 60%. LOS ISLOTES OBTENIDOS ERAN VIABLES TINTORIALMENTE Y CAPACES DE SEGREGAR INSULINA FRENTE A LA GLUCOSA Y A LA FORSKOLINA. SE ANALIZO ASIMISMO EL EFECTO DE LA DURACION DEL CULTIVO (1 O 7 DIAS) Y LA CONCENTRACION DE GLUCOSA EN EL MEDIO (5.5 O 16.7 MM) SOBRE LA RESPUESTA INSULINO SECRETORA, EL CONTENIDO DE INSULINA Y LA UTILIZACION DE LA D-(5-3H)GLUCOSA Y OXIDACION DE LA D-(6-14C)GLUCOSA. EL CULTIVO MEJORO GLOBALMENTE LOS TRES PARAMETROS ESTUDIADOS. LA PRESENCIA DE CONCENTRACIONES ELEVADAS DE GLUCOSA MEJORO LA CAPACIDAD DE SECRECION DE INSULINA, EL CONTENIDO DE LA HORMONA Y DE UNA MANERA PRIMORDIAL LOS PROCESOS OXIDATIVOS MITOCONDRIALES.