Preparacion de inmunoliposomas anti-cd34. Aplicacion a la seleccion celular

Resumen

Se prepararon inmunoliposomas convencionales (IL), por el método de unión del SPDP y utilizando el anticuerpo monoclonal My10 dirigido contra el antígeno CD34, el cual se expresa en células hematopoyéticas progenitoras. Variando la relación anticuerpo/lípido se obtubieron IL con diferentes densidades de anticuerpo. Estos reconocían específicamente las células CD34+. La eficiencia de unión se incrementaba aumentando la concentración lipídica o la densidad de anticuerpo de trabajo. La estabilización estérica de los IL se llevó a cabo incluyendo en la composición lipídica PEG(2000) PE y PDP-PEG(3400)PE hasta un 5% final de PEG. La diferente longitud de las cadenas de polímero no alteraba la estabilidad estérica de los liposomas y permitía obtener eficiencias de unión del anticuerpo mejores que las obtenidas hasta el momento. Los inmunoliposomas estabilizados estéricamente (SIL) preparados mediante el reactivo SMPB (enlace tioéter, eficiencia=100%) son útiles para aplicaciones in vivo, mientras que el reactivo SPDP (puente disulfuro, eficiencia del 70%) es adecuado para la preparación de SIL para la selección ex vivo de células CD34+. Los SIL se unen especificamente a células CD34+ presentes en bajos porcentajes, sin afectar a la viabilidad celular. Para la selección celular magnética, se encapsuló en liposomas dos tipos de ferrofluidos, uno estabilizado con dextrano (FF- DT) y otro con citrato (FF-CT). Los inmunomagnetoliposomas se unían a las células KG-la, pero tenían una elevada unión inespecífica, la cual aumentaba al incrementarse la concentración lipídica de trabajo. La eficiencia de captura de los inmunomagnetoliposomas con FF-CT (90%) fue superior a la de los que contenían FF-DT (19%). La pureza obtenida era dependiente del porcentaje inicial de células CD34+ y de la línea celular utilizada como CD34-. Por ello, este sistema tiene limitada su aplicación.