Desarrollo de herramientas para la caracterización de la chaperonina de Haloferax mediterranei

Abstract

En esta tesis se ha tratado de sentar bases de trabajo para la futura caracterización funcional y estructural de la chaperonina de la haloarquea H.mediterranei y su posible uso en nanotecnología. Para alcanzar estos objetivos se han clonado y secuenciado los genes codificantes para chaperoninas en H.mediterranei cpna, cpnb y cpnc), lo que ha permitido expresar estos genes en E.coli para su estudio de forma individual. La reconstrucción de la chaperonina a partir de las subunidades desnaturalizadas han permitido observar importantes diferencias en su comportamiento in vitro. Estas diferencias se basan en la capacidad de la subunidad CPNA de formar anillos y filamentos durante el proceso de aumento de la fuerza iónica, mientras que a través del mismo procesamiento CPNB no forma estructuras cuaternarias. La construcción de modelos tridimensionales por homología ha permitido localizar, a través del mapa de interacciones descritas a partir de la cristalización del termosoma, dos zonas con cambios aminoacídicos que pudieran ser significativos. También se ha realizado un estudio estructural durante la reconstitución a partir de la subunidad CPNA reconstituída. Estos estudios muestran dos grupos de chaperoninas, uno con siete subunidades por anillo y otro con ocho subunidades. Estudios sobre la chaperonina nativa han mostrado simetría ocho ya que esta partícula está formada por cantidades similares de CPNA y CPNB se ha sugerido que CPNB fuerza simetría ocho en la estructura nativa debido a interacciones más débiles entre ella misma y con las subunidades adyacentes en la formación del anillo.