Nitrato reductasa de la bacteria desasimilativa reductora de hierro, "Geobacter metallireducens" purificación y caracterización

Zusammenfassung

El trabajo realizado ha comprendido estudios sobre la purificacion y caracterizacion de la nitrato reductasa desasimilativa de la bacteria geobacter metallireducens. Esta bacteria se ha convertido en un organismo modelo para el estudio de la reduccion microbiana de hierro acoplada a la oxidacion de materia organica en sedimentos anaerobios, proceso de importante papel ecologico y gran interes biotecnologico en aspectos de biorremediacion. Sin embargo, muy poco es lo que se conoce en estos momentos de estos microorganismos desde el punto de vista bioquimico y molecular, siendo trabajos como el que aqui se resume, pioneros en este tipo de estudio. El desarrollo de este trabajo ha permitido purificar la enzima nitrato reductasa y caracterizar sus propiedades. La conclusion del mismo es que la nitrato reductasa de g. Metallireducens parece ser la unica actividad de este tipo presente en este microorganismo. Es una proteina ligada a membrana. Para su purificacion se ha diseñado un metodo que ha probado ser eficaz tambien en la purificacion de proteinas similares de otras bacterias; En particular, proteinas fuertemente ligadas a membrana, de gran hidrofobicidad y tamaño. La nitrato reductasa de g. Metallireducens corresponde a un tipo novel de nitrato reductasa con caracteristicas distintas a las conocidas hasta el momento. Presenta actividad de nitrato reductasa y de nitrito reductasa, se han caracterizado sus constantes cineticas, los valores de ph y temperatura optimos, la especificidad por substrato y el efecto de inhibidores en ambas actividades. Es un complejo que consta de tres subunidades, cuyo estudio ha permitido generar datos de secuencia que han servido para demostrar su escasa relacion con otras proteinas y para diseñar la estrategia de identificacion y clonacion de los genes responsables de su expresion. Aparentemente esta nitrato reductasa esta asociada a una bacterioferritina.