Caracterización fenotípica y funcional del epitelio conjuntivaldistribución topográfica e inmunosenescencia en individuos sanos y alteraciones inmunopatológicas en pacientes con conjuntivitis adenovírica

Resum

El sistema inmunitario asociado a las mucosas (Mucosal-associated lymphoid tissue, MALT) es parte de la primera línea de defensa del organismo frente a la invasión de patógenos. En la mucosa ocular coexisten varios de estos sistemas, pero sin duda alguna, el más importante es el tejido linfoide asociado a la conjuntiva (Conjunctival-associated lymphoid tissue, CALT) que proporciona protección a la superficie ocular. Este tejido está formado por células linfoides distribuidas de forma difusa en el epitelio conjuntival (linfocitos intraepiteliales, IELs) y agrupadas en folículos linfoides en la lámina propia. El objetivo del presente estudio fue analizar la distribución topográfica y el fenotipo celular del epitelio conjuntival en individuos sanos y evaluar el efecto del envejecimiento y la inflamación, provocada por una conjuntivitis de etiología vírica, en dicho epitelio. Para ello se recogieron muestras mediante cepillado conjuntival de sujetos sanos en dos rangos de edad: menores de 35 años y mayores de 65 años, y muestras de pacientes con sospecha clínica de conjuntivitis vírica. Posteriormente, se caracterizaron todas las células conjuntivales obtenidas (epiteliales y linfoides) mediante citometría de flujo y se analizó, mediante técnicas de biología molecular, el DNA extraído de todas las muestras diagnosticadas clínicamente de conjuntivitis vírica. Nuestros resultados demostraron que en el epitelio conjuntival de personas sanas existe una población de IELs, más numerosos en tarso superior y fondo de saco inferior, que en conjuntiva bulbar superior. En esas 2 zonas, predominan los linfocitos de estirpe T, repartiéndose casi al 50 % los linfocitos T cooperadores (Th, CD4+) y los T citotóxicos (Tc, CD8+). Estas proporciones se modifican con la edad (al menos en el fondo de saco inferior) disminuyendo el porcentaje de linfocitos T en beneficio de los B y disminuyendo también el porcentaje de linfocitos T CD8+. Comprobamos, además, la existencia de dos grandes poblaciones celulares en la conjuntiva, compuestas por células de diferente tamaño y granularidad citoplasmática cuya viabilidad se modifica con el envejecimiento, aumentando en general en todas las zonas topográficas estudiadas. Además, el perfil de los IELs y la viabilidad del epitelio, son muy diferentes cuando se comparan pacientes con conjuntivitis vírica/adenovírica, frente a individuos sanos, con un incremento del infiltrado inflamatorio rico en linfocitos T y en concreto de linfocitos T citotóxicos (CD8+), por ser éstos los más activos en la acción antiviral y un aumento de las células simples. La viabilidad celular aumenta por la inflamación, tanto en células simples como en complejas. En las simples probablemente para desarrollar una adecuada respuesta anti-inflamatoria (incluyendo un aumento de IELs) y en las complejas prolongando la viabilidad del epitelio el tiempo suficiente como para completar el ciclo de replicación viral. Además, hemos podido comprobar que el uso de técnicas de biología molecular nos ayuda a un correcto diagnóstico etiológico de diversos procesos clínicos, aunque, en nuestro caso y debido a lo inespecífico del tratamiento, no haya supuesto una ayuda terapéutica.