Fisiología de las células plasmáticas circulantes en la respuesta humoral humanaPapel de los receptores de quimiocinas, de il-6 y del factor de transcripción prdi-bf1

Resumen

El análisis de la respuesta inmune humoral analiza esencialmente el crecimiento y la diferenciación de los linfocitos B (LB) después de un estímulo antigénico específico. Técnicamente es difícilo abordar los efecots de la estimulación antigénica de los LB normales y la aparición de células plasmáticas (CP). Gran parte de nuetro conocimiento sobre las CP se basa en experimentos in vitro o en modelos animales ya que son muy escasos los estudios in vivo en CP humanas. En esta tesis se caracterizan las CP humanas que aparecen en sagre periférica (SP) tras una vacunación con toxoide tetánico (Tet) como estímulo específico. El presente trabajo plante, como objetivo general, desarrollar un análisis de la respuesta de las células plasmáticas humanas circulantes después de la inmunización con toxoide tetánic. Este objetivo se concretan en: 1)Determinar la expresión de los receptores de quimiocinas en las CP de amígdala, sangrd periférica, médula ósea y lámina propia. 2) Estudiar la cinética de las CP presentes en la circulación y la magniturd de la respuesta, esto es, el número de CP que son liberadas a la circulación después de la inmunización con toxoide tetánico. 3) Caracterizar la subpoblación de CP específicas que se genera tras la inmunizació9n con toxoide tetánico en los siguientes aspectos. 4) Comparación de las CP específicas de la vacunación con toxoide tetánico con CP de médula ósea. 5) Estudio comparativo de las mutaciones de los genes IgVH3 de CP circulantes. Las primeras CP aparecen en SP entre los días 5,6 después de la vacunación, son CP productoras de AC anticuerpos anti-Tet. El marcaja con Ag Tet intracitoplasmático revela una población de CP no específica del AG que desencadena la respuesta, y dos poblaciones de CP específicas del AG que secretan Ac de distinta afinidad. Las CP aisladas de SP producen activamente Ac Tet-específicos y la producción de estos AC se estimula al añadir al cultivo interleuquina 6 (IL-6). La IL-6 es un factor de crecimiento de CP diferenciadas, se sabe que los LB humanos estimulados con activadores pliclonales secretan niveles elevados de AC si se les añade IL-6. Sin enmbaro, no se observan direncias al cuantificar la IgG producida por las células estimuladas con IL-6 y las no estimulas, así la IL-6 producen un efecto dirigido específicamente sobre las CP Tet específicas. En cuanto a la proliferación aparece una tasa mayor en las CP Tet específicas que en las no específicas, además esta proliferación se favorece por la IL-6, e igualmente parece que la acción de la IL-6 es mayor sobre la población de CP específicas. El análisis de marcadores de superficie revela dos poblaciones fenotípicamente distintas, inducidas ambas por la inmunización con Tet. Aunque se trata de una población de células funcionales efectoras en un estadio de diferenciación avanzado, el ensayo con BRDU dio resultados positivos, estas células presentan una tasa de proliferación de un 20 % aproximadamente y parece que las CP Tet + tiene más capacidad de proliferación que las CP de específicidad diferente, además el estímulo de IL-6 aumenta la capacidad de proliferación.