Receptores nicotínicos de acetilcolina de la célula cromafín bovinaClonaje molecular, análisis genético y funcional y estudio de un dominio implicado en la transducción de la señal de activación del canal iónico

Resumen

Los receptores nicotínicos de acetilcolina pertenecen a una familia de receptores regulados por ligandos que forman canales iónicos. En la célula cromafín bovina, al igual que sucede en varias zonas del sistema nervioso central y periférico, se han detectado dos tipos de receptores nicotínicos farmacológicamente diferenciables; un receptor que no posee afinidad por la toxina de serpiente denominada alfa-bungarotoxina y que es el principal responsable de la activación de la respuesta secretora de catecolaminas al torrente sanguíneo, y otro tipo de receptor que posee alta afinidad por la alfa-bungarotoxina y cuya función permanece sin aclarar. Un primer objetivo de esta tesis doctoral ha consistido en el clonaje molecular y estudio funcional de las subunidades nicotínicas que podrían formar el receptor que es responsable de la secreción de catecolaminas. Se han clonado así las subunidades alfa5 y beta4, que junto con la subunidad alfa3 previamente clonada, son capaces de formar receptores de tipo nicotínico con farmacología similar a los que no unen alfa-bungarotoxina y que serían los responsables de la secreción de catecolaminas en la célula cromafín bovina. Por otro lado, existen muchos datos sobre los dominios y aminoácidos con importancia funcional en el sitio de unión de agonistas y en el canal iónico del receptor, pero no se sabe casi nada sobre cómo se conectan ambos elementos. Tratar de arrojar alguna luz sobre este tema ha constituido un segundo objetivo de este trabajo. Mediante la construcción de proteínas quiméricas formadas por las subunidades alfa7 y alfa3 del receptor nicotínico neuronal de acetilcolina, se ha determinado que una posición aminoacídica (un residuo con carga negativa) podría jugar un papel fundamental en el mecanismo de transducción entre la unión del agonista y la apertura del canal iónico.