Aplicación de técnicas in vitro a la conservación de Thymus moroderi

Résumé

Thymus moroderi Pau ex Martínez es un endemismo iberolevantino caracterizado por su uso tradicional como planta medicinal y como base para la aromatización de licores (cantueso). Esta especie está catalogada como casi amenazada (NT) en la Lista Roja de la Flora Vascular Española. Hemos desarrollado de forma exitosa estrategias de conservación ex situ para esta especie basadas en el cultivo in vitro que permiten tanto una conservación a corto-medio plazo como a largo plazo. Para la conservación in vitro de Thymus moroderi desarrollamos inicialmente un protocolo de micropropagación a partir de segmentos nodales y apicales de material adulto. El inicio de cultivo a partir de material silvestre presentó una elevada dificultad debido a altos índices de contaminación y falta de crecimiento del material no contaminado. Sin embargo, una vez establecido el cultivo in vitro el material puede multiplicarse y enraizar en medio MS con sacarosa 30 g l-1 y agar 7 g l-1 sin necesidad de añadir reguladores del crecimiento. La aclimatación de las plántulas enraizadas a condiciones ex vitro no presenta ninguna dificultad y es mayor del 90%. Para la conservación a medio plazo recurrimos a técnicas de crecimiento lento adicionando al medio de cultivo diferentes concentraciones de agentes osmóticos. Finalmente seleccionamos el medio MS con sacarosa 15 g l-1 y manitol 15 g l-1 combinado con oscuridad y baja temperatura (4 ºC), lo que nos permitió mantener los explantos durante 29 semanas sin necesidad de ser subcultivados, antes de transferirlos a condiciones estándar de temperatura. Durante este periodo de almacenamiento a baja temperatura pudimos constatar el papel relevante de putrescina libre y conjugada y espermidina ligada en la adaptación de las plantas a la baja temperatura. Para la conservación a largo plazo desarrollamos tres técnicas de crioconservación: vitrificación en gota, vitrificación y encapsulación-desecación. La vitrificación y vitrificación en gota produjeron los mejores resultados, así tras 60 y 30 min de deshidratación en PVS2, respectivamente, se obtuvieron los porcentajes más altos de supervivencia (80 y 71.4%). En material procedente de crioconservación por vitrificación realizamos un análisis de RAPDs con el fin de estudiar la estabilidad genética del material crioconservado, obtuvimos un 0.34% de variación. Finalmente, realizamos una primera aproximación al estudio del perfil metabólico y de los aceites esenciales de material procedente de micropropagación y crioconservación.