Métodos de cuantificación de tirosina y fenilalanina como complemento al screening neonatal

Resumen

La cuantificación de los aminoácidos tirosina y fenilalanina tiene un enorme interés para el diagnóstico preciso de las aminoacidopatías de dichos aminoácidos así como para el seguimiento de los pacientes diagnosticados y bajo tratamiento dietético. El objetivo de la presente memoria es el desarrollar un método que permita cuantificar ambos aminoácidos en muestras de suero y en muestras de sangre sobre papel de filtro especial. Para la consecución de este objetivo se utilizaron dos métodos: el método de cromatografía liquida de alta presión (HPLC) y el método enzimático basado en la utilización de la enzima fenilalanina amonio liasa. Los resultados obtenidos muestran que es posible utilizar ambos métodos pueden aplicarse a la cuantificación simultánea de tirosina y fenilalanina en muestras de suero el método de HPLC tiene mayor sensibilidad y permite la cuantificación en muestras de sangre desecada sobre papel. Estos métodos mostraron una buena fiabilidad. Al comparar los valores obtenidos con estos métodos se encontró que para la técnica de HPLC es equivalente la utilización de sueros a la de muestras de sangre sobre el papel este hecho presenta enormes ventajas ya que la utilización de muestras de sangre sobre papel permite obtener las muestras con menor agresión física para el paciente mayor sencillez en el proceso de extracción al no ser necesario una previa desproteinización mayor facilidad de conservación de las muestras. El método enzimático debido a su baja sensibilidad no fue posible utilizar muestras de sangre sobre papel. Se estudiaron 50 casos en los que el screening neonatal mostró incrementados los aminoácidos aromáticos al cuantificarlos mediante HPLC y comparar las medias frente a un grupo de recién nacidos cuyo screening fue normal se encontró que la diferencia de las medias fue significativa.