Análisis estructural de la adaptación a medios de elevada fuerza iónica de la glucosa deshidrogenasa de "Haloferax mediterranei"

Résumé

El gen codificante de la glucosa deshidrogenasa (GlcDH) de Haloferax mediterranei, se expresó en E.coli, obteniéndose una elevada concentración de proteína en forma de cuerpos de inclusión. La enzima fue renaturalizada y purificada, siendo idéntica a la obtenida a partir de Hfxmediterranei, lo que permitió su uso en ensayos de cristalización y determinación de su estructura. Ésta se llevó a cabo mediante el método de "hanging drop", obteniéndose la estructura tridimensional a 2.0A mediante difracción de rayos X. Del análisis de esta se dedujo la existencia de un elevado número de residuos ácidos en superficie, con la consiguiente disminución de residuos de lisinas. La generación y estudio de dos formas mutantes generadas mediante mutagénesis dirigida de un residuo implicado en la unión del Zn, la caracterización estructural a excelente resolución y el estudio preliminar de los sustratos en el centro activo permitieron proponer un mecanismo plausible de catalisis. También se realizó un triple mutante con cierto impacto sobre la tolerancia salina de la enzima, -- estudios estructurales todavía están en desarrollo. Las estructuras de la forma no mutada y de uno de los mutantes están depositadas en el Protein Data Bank.