Trwd, una proteína implicada en la conjugación del plásmido r388purificación, caracterización y asociación con membranas

Resumen

La conjugación bacteriana es un proceso de transferencia de DNA que tiene lugar mediante un mecanismo multienzimático. En el caso del plásmido conjugativo R388, trwD es un gen esencial para la conjugación, para la expresión del pilus conjugativo y para la sensibilidad al fago PRD1. La secuencia deducida de aminoácidos de TrwD muestra gran homología con la superfamilia PulE/VirB11 de potenciales ATPasas implicadas en diversos procesos de transporte de macromoléculas a través de membranas. Se ha purificado la proteína TrwD y se ha demostrado la actividad ATPasa de dicha proteína, así como la esencialidad de tal actividad para el fenómeno de la conjugación. Por otra parte, la localización de TrwD, tanto en la fracción soluble como en la de membrana externa, puede indicar una asociación periférica de TrwD con la membrana. Así, se ha estudiado el efecto producido tras la adición de TrwD, y diferentes mutantes en TrwD, a membranas modelo como una aproximación experimental para comprender la naturaleza de la interacción de TrwD con la membrana bacteriana. Se ha demostrado que TrwD es capaz de inducir la agregación, la mezcla de los lípidos y la liberación de los contenidos acuosos de los liposomas, lo cual sugiere la capacidad de TrwD de interaccionar con la membrana de Escherichia coli.