Biopsia hepatica quirurgica adecuada para el aislamiento y cultivo de hepatocitos humanos. Aplicacion de este modelo experimental a la fisiopatologia de la ictericia obstructiva

Resumen

PARA COMPROBAR SI LA TASA DE BILIRRUBINEMIA ES UN BUEN MARCADOR DE LA FUNCION HEPATICA EN LA ICTERICIA OBSTRUCTIVA (IO) SE PRETENDE DISEÑAR EL MODELO DE CULTIVO PRIMARIO DE HEPATOCITOS HUMANOS AISLADOS Y ENSAYAR SOBRE EL Y SOBRE EL CULTIVO PRIMARIO DE HEPATOCITOS AISLADOS DE RATA DISTINTAS CONCENTRACIONES DE BILIRRUBINA TANTO CONJUGADA (BC) COMO NO CONJUGADA (BNC).SE REALIZAN ESTUDIOS ANATOMICOS SOBRE HIGADOS HUMANOS DE NECROPSIA PARA IDENTIFICAR LA LOCALIZACION COLONICA EN EL PARENQUIMA HEPATICO HUMANO DE DONDE EXTRAER UNA BIOPSIA HEPATICA ADECUADA PARA AISLAR HEPATOCITOS HUMANOS, SE ESTUDIA LA POBLACION EN QUE SE OBTIENE ESTA BIOPSIA, SE APORTA LA TECNICA DE OBTENCION DE LA MISMA, LA TECNICA DE PERFUSION, LA TECNICA DE CULTIVO DE HEPATOCITOS HUMANOS Y LA METODOLOGIA DE LAS DETERMINACIONES PARA CARACTERIZARLO BIOQUIMICAMENTE. SE APORTA LA METODOLOGIA DE LOS ENSAYOS DE HEPATOTOXICIDAD SOBRE LOS CULTIVOS DE HEPATOCITOS. LOS METODOS ANATOMICOS PERMITEN ENCONTRAR EL PUNTO MAS IDONEO DEL PARENQUIMA HEPATICO DE DONDE OBTENER LA BIOPSIA HEPATICA. SE DEMUESTRA QUE SU OBTENCION NO COMPORTA MORBIMORTALIDAD EN 143 PACIENTES ESTUDIADOS, QUE PRESENTA UN ELEVADO RENDIMIENTO CELULAR CON BUENA VIABILIDAD DE LOS HEPATOCITOS Y LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE LOS CULTIVOS DE HEPATOCITOS HUMANOS AISLADOS DEMUESTRA QUE SE COMPORTAN DE FORMA SIMILAR A LOS HEPATOCITOS EN EL HIGADO HUMANO IN VIVO. EL ENSAYO DE HEPATOTOXICIDAD DE LA BILIRRUBINA DEMUESTRA QUE LA BNC ES TOXICA TANTO EN EL MODELO DE CULTIVO DE HEPATOCITOS DE RATA COMO EN EL DE HEPATOCITOS HUMANOS ANTE CONCENTRACIONES DE LA MISMA QUE SE DAN CON FRECUENCIA EN LA ICTERICIA OBSTRUCTIVA CLINICA, MIENTRAS QUE EN NINGUNO DE LOS DOS MODELOS EXPERIMENTALES BIOLOGICOS IN VITRO ES NADA TOXICA, A NINGUNA DE LAS CONCENTRACIONES ENSAYADAS, LA BC.