Elementos estructurales involucrados en el ensamblaje y transporte de subunidades de los receptores nicotínicos de acetilcolina

Résumé

El receptor nictínico es una proteína oligomérica de membrana, formada por la asociación de cinco subunidades homólogas, perteneciente al grupo de los canales iónicos activados por ligando. Las subunidades del receptor se organizan alrededor de un eje de simetría radial, formando un canal iónico a lo largo de dicho eje. El receptor nicotínico se expresa principalmente en reuronas, aunque también aparece en tejidos no neurales, capacitando a las células para responder a estímulos colinérgicos. En esta tesis doctoral se ha estudiado la implicación de aminoácidos localizados en el segmento M1 de subunidades neuronales, en la biogénesis y función del receptor. Para ello se han realizado construcciones quiméricas y mutaciones usando la subunidad a7 (como representante del grupo de receptores sensibles a a-bungarotoxina (a-Bgt) y las subunidades a3 y B4 (pertenecientes al grupo de receptores insensibles a a-Bgt). En el trabajo realizado se distinguen dos partes claramente diferenciadas, usándose, en ambas, la misma metodología para el estudio de las propiedades de los receptores, el marcaje de los receptores con ligandos radiactivos para cuantificar los receptores correctamente ensamblados. En la primera partes del proyecto se han identificado tres aminoácidos situados en el domino M1 de la subunidad a7 involucrados en la determinación de la especificidad del ensamblaje de dicha subunidad. Además, se ha demostrado la existencia de una interacción entre las regiones citoplásmicas de los segmentos transmembrana M1 y M2 de las subunidades a7, En la segunda parte del proyecto se ha caracterizado el papel que juega un residuo de arginina conservado en todas las subunidades de los receptores de acetilcolina. Se ha estudiado dicho aminoácido en las subunidades de los dos grupos de receptores neuronales antes citados. Para ello, se ha evaludado el efecto de la mutación de la arginina en las subunidades a7 y en las a3 y b