Elementos reguladores de la actividad transcripcional basal de las subunidades alfa5, beta4 y alfa9 del receptor nicotínico neuronal de acetilcolina
- VALOR BECERRA, LUIS MIGUEL
- Manuel Criado Herrero Director
Defence university: Universidad Miguel Hernández de Elche
Fecha de defensa: 07 March 2003
- Francisco J. M. Mojica Chair
- María Domínguez Castellano Secretary
- Eduardo Domínguez del Toro Committee member
- Juan Galcerán Saéz Committee member
- Mercedes Palmero Cabezas Committee member
Type: Thesis
Abstract
El receptor nicotínico neuronal de acetilcolina presenta múltiples subtipos compuestos por determinadas combinaciones de subunidades con diferentes patrones de distribución en el organismo. Una aproximación para tratr de comprender los mecanismos transcripcionales por los que se expresan estas subunidades ha consistido en el análisis y aislamiento de promotores, con el fin de caracterizar los elementos presentes en el DAN responsables de la actividad transcripcional y de las proteínas con las que interaccionan. Para ello se ha hecho uso de una metodología básica como la manipulación de ácidos nucleicos, y de una metodología específica como el escrutinio de genotecas, ensayos de protección frente a Rnasas, transfección transitoria de cultivos celulares, ensayos de luciferasa y beta-galactosidas, ensayos de retraso (EMSA) y de impresión de huellas o footprinting. Los resultados y conclusiones más relevantes han sido los siguientes: 1,- La región entre 111 y 39 del promotor de la subunidad alfa5 bovina es esencial para su actividad transcripcional basal en células de origen neuronal y no neuronal, por la presencia de cinco cajas GC que pueden unir el factor Sp1, al parecer responsable de un mecanismo sinérgico de activación de la maquinaria transcripcional de la RNA polimera II. Además, el promotor de la subunidad alfa5 es activado en células C2C12 en presencia de señales inductoras de diferenciación muscular en células C2C12, en parte por mediación de las cajas GC. 2,- Existen regiones en el promotor de la subunidad beta4 que se encuentran conservadas en bovino y humano a nivel de secuencia (60-90% de identidad), aunque los elementos importantes en la regulación transcripcional basal en células de origen nueronal y no neuronal se localizan fuera de las regiones conservadas (-99/-63 en el caso del promotor bovino y -74/-40 en el caso del promotor humano).